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產(chǎn)品中心

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KATO3細(xì)胞

產(chǎn)品簡介

KATO3細(xì)胞(人胃癌細(xì)胞)
形態(tài):圓形,半貼壁半懸浮生長
含量:>1x106 個(gè)/瓶
污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性
規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

產(chǎn)品型號(hào):
更新時(shí)間:2024-06-13
廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
訪問量:11106

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應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)

一、細(xì)胞特性

  1. 細(xì)胞名稱:KATO3細(xì)胞(人胃癌細(xì)胞)
  2. 形態(tài):圓形,半貼壁半懸浮生長
  3. 含量:>1x106 個(gè)/
  4. 污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性
  5. 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝


二、細(xì)胞接收后的處理:
1、貼壁細(xì)胞

  1. 收到T25方瓶細(xì)胞后,請(qǐng)檢查是否漏液,如果漏液,請(qǐng)拍照片發(fā)給我們(凍存管細(xì)胞收到后直接37℃水浴復(fù)蘇或直接放置于液氮中長期儲(chǔ)存)。
  2. 請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài),去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
  3. 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,換用新鮮的*培養(yǎng)基。
  4. 如果細(xì)胞長滿(90%以上)請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代。
  5. 接到細(xì)胞次日,請(qǐng)檢查細(xì)胞是否污染,若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系。

2、懸浮細(xì)胞

  1. 收到細(xì)胞后,請(qǐng)檢查是否漏液,如果漏液,請(qǐng)拍照片發(fā)給我們。
  2. 請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài),去掉封口膜并將15ml離心管置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
  3. 1200rpm離心5min,棄去15ml離心管中的培養(yǎng)基,細(xì)胞沉淀用新鮮的*培養(yǎng)基重懸并培養(yǎng)。
  4. 如果細(xì)胞長滿(90%以上)請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代。
  5. 接到細(xì)胞次日,請(qǐng)檢查細(xì)胞是否污染,若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系。

                      
本公司的細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程,供參考
一、培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

  1. 準(zhǔn)備IMDM培養(yǎng)基,90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%
  2. 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%
  3. 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。

二、細(xì)胞處理:

1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2)KATO3細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

   對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

  1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
  2. 2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化2-3分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細(xì)胞的培養(yǎng)基終止消化。
  3. 輕輕吹打后吸出,移入15ml離心管中,在1200RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。
  4. 移入到事先準(zhǔn)備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),先要消化處理并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。消化方法按照細(xì)胞傳代方法的1-3步驟進(jìn)行,后的重懸液使用血清。懸浮細(xì)胞直接計(jì)數(shù)后離心,用血清重懸浮,加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。

注意事項(xiàng):
1. 收到凍存管細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。
2. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
3. 細(xì)胞用途:僅供科研使用。

發(fā)貨方式:
復(fù)蘇后發(fā)貨:我們復(fù)蘇細(xì)胞后發(fā)貨,貨期一周左右,免運(yùn)費(fèi)。(氣溫較好建議復(fù)蘇后發(fā)貨)
凍存發(fā)貨(干冰運(yùn)輸):需額外增加干冰運(yùn)費(fèi),選擇干冰運(yùn)輸?shù)奈覀儼l(fā)兩管細(xì)胞,為了保證客戶接種可靠性多發(fā)一管。(氣溫低于0℃須凍存發(fā)貨)
細(xì)胞發(fā)貨采取專業(yè)的運(yùn)輸包裝,并選擇快捷的運(yùn)輸方式(順豐速運(yùn)或其他空運(yùn)快遞)
本公司細(xì)胞引種來源:ATCC、DSMZ、ECACC、武大細(xì)胞庫、上海生化細(xì)胞所、中國科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會(huì)等。


細(xì)胞培養(yǎng)常用試劑使用問答
1.谷氨酰胺使用方法是什么?
答:谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定,故4℃下放置1周可分解50%,使用中單獨(dú)配制,置-20℃冰箱中保存,用前加入培養(yǎng)液中。
2.碳酸氫鈉在室溫條件存放是否穩(wěn)定?
答:碳酸氫鈉白色粉末,或不透明單斜晶系細(xì)微結(jié)晶。比重2.159。無臭、味咸,可溶于水,微溶于乙醇。其水溶液因水解而呈微堿性,受熱易分解,在65℃以上迅速分解,在270℃時(shí)*失去二氧化碳,在干燥空氣中無變化,在潮濕空氣中緩慢分解。
3.培養(yǎng)細(xì)胞生長減慢的原因有哪些?其解決辦法有哪些?
 答:可能得原因有:更換了不同的培養(yǎng)液或血清;培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長必需成分如谷氨酰胺或生長因子等耗盡或缺乏或已被破壞;培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染;試劑保存不當(dāng);比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分,比較新血清與舊血清支持細(xì)胞生長實(shí)驗(yàn)找出可能的原因。
解決辦法:增加起始培養(yǎng)細(xì)胞濃度;讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液;換入新鮮配制培養(yǎng)液;補(bǔ)加谷氨酰胺或生長因子等;用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng),如發(fā)現(xiàn)污染,丟棄培養(yǎng)物,或用抗生素除菌;血清需保存在-5℃到-20℃;培養(yǎng)液需在28℃避光保存;含血清*培養(yǎng)液在2-8℃保存,并在2 周內(nèi)用完;分離培養(yǎng)物,檢測支原體。
4.L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)中重要嗎?它在溶液中不穩(wěn)定嗎?
答:L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)非常重要的。脫掉氨基后,L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過一段時(shí)間后會(huì)降解,降解率隨保存溫度而變。L-谷氨酰胺的降解導(dǎo)致氨的形成,而氨對(duì)于一些細(xì)胞具有毒性。

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